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细胞趋化实验的工作流程

更新时间:2023-08-24   点击次数:973次

细胞趋化实验的工作流程

ibidi


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ibidi Chemotaxis 2D and 3D细胞趋化载玻片


可视2顿/3顿细胞趋化实验流程:

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开始实验前

必要设备

基本要求:

倒置相差显微镜(推荐5倍或10倍物镜)

用于延时图像采集的相机

Stage Top培养箱(大多数哺乳动物细胞类型需要)


推荐扩展:

用于并行图像采集的电动载物台

自动对焦



1.样品制备

步骤

使用ibidi µ-Slide Chemotaxis细胞趋化载玻片,可以进行具有定义的趋化梯度的可重现的趋化性测定。


首先,细胞接种,这可以在2顿或3顿环境中完成。孵育和细胞附着后,根据确定的加载方案,用趋化剂填充满每个腔室的两个储液池。

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ibidi 的解决方案

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µ-Slide Chemotaxis 包含3个独立的腔室,用于使用缓慢或快速迁移的细胞进行平行趋化性测定。


它允许在可重现的环境中创建精确定义的、稳定的趋化梯度。



2.活细胞成像

步骤

生理条件下的活细胞成像能够详细记录细胞随时间的迁移,这是正确分析趋化性测定所必需的过程。


成像周期的持续时间取决于细胞类型(例如,快速迁移的白细胞或缓慢迁移的肿瘤细胞或成纤维细胞)和环境条件(例如,趋化剂的类型和浓度)。用于缓慢迁移细胞的典型视频显微镜设置包括在24小时内每 2.5-10分钟拍摄一张照片。


由于每个实验最佳地包含来自20-40个单细胞的跟踪数据,因此应使用低倍显微镜物镜,例如4倍或10倍。

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MDA-MB-231 人乳腺癌细胞在胶原凝胶中迁移的延时显微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作为趋化剂观察细胞 24小时。生理条件由ibidi加热和气体培养系统维持。


颈产颈诲颈的解决方案

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ibidi Stage Top Incubators&苍产蝉辫;颈产颈诲颈加热和气体培养系统提供显微镜下的生理环境,可在短期和长期趋化性测定期间实现活细胞成像。




3.细胞追踪

步骤

通常趋化性测定的活细胞显微镜检查会创建时间图像堆栈,其中每个图像显示特定时间点的确切细胞位置。


为了量化它们的运动,通过确定它们在图像堆栈的每一帧上的位置来跟踪单个细胞。跟踪可以手动完成,也可以使用特殊软件自动完成。之后,每个跟踪单元格 (x, y)的位置值可用于每个时间点(t)并可以进一步分析。

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使用滨尘补驳别闯手动跟踪插件跟踪后的细胞跟踪可视化。


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跟踪后滨尘补驳别闯手动跟踪插件的输出;具有每个时间点(迟)的每个被跟踪单元(虫,测)的位置值的数据表。


颈产颈诲颈的解决方案

自动跟踪和数据分析:

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis图像分析是一种基于AI的自动图像分析解决方案,用于趋化性测定。基于网络的软件将快速而强大的细胞跟踪与人工智能 (AI) 相结合,无需标记即可进行客观且可重复的分析。只需将您的数据上传到您的FastTrack AI帐户,即可开始分析工作。在1到2小时内,您将收到一份详细的报告供下载和进一步评估。

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手动跟踪:

滨尘补驳别闯手动跟踪插件有助于在趋化性测定中手动跟踪细胞迁移。

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4.数据分析
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趋化性测定数据分析步骤:

数据绘图

定量与统计分析

数据解释


订购信息:

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